<blockquote id="ykis2"></blockquote>
<input id="ykis2"></input>
  • <blockquote id="ykis2"></blockquote>
  • <samp id="ykis2"></samp>
    <menu id="ykis2"><input id="ykis2"></input></menu>
  • <menu id="ykis2"></menu>
  • <samp id="ykis2"><s id="ykis2"></s></samp>
    論文分類>>論文庫首頁 | MBA論文 | MPA論文 | 教育碩士論文 | 法律碩士論文 | 工程碩士論文
     
    當前位置:主頁 > 碩士論文庫 > 工程碩士 > 生物醫學工程 > 文章內容

    左旋四氫巴馬汀對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷后海馬CA1區Fas和F
    關鍵字:損傷,對大,GH,KL,EF,CD,yz,AB,MN,OP, 發布時間:2011-08-21

    醫藥導報2010年9月第29卷第9期 ?藥物研究? 左旋四氫巴馬汀對大鼠局灶性腦缺血一再灌注損傷后 海馬CA,區Fas和FasL蛋白表達的影響 馬小亞1,武冬梅2,李 明3 (1.兩安交通大學醫學院第二附屬醫院藥劑科,710004;2.西安市兒奄醫院,710003;3.西安交通大學醫學院組織 胚胎學教研室,710061) [摘要]目的探討左旋四氫巴馬汀(L-THP)對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的保護作用及對海馬CA.區凋 亡蛋白Fas、FasL表達的影響。方法參照改良Longa法建立局灶性腦缺血-再灌注模型,應用ImageProPlus6.0專業圖 像分析軟件測定腦梗死體積,比色法測定肌酸激酶(CK)活力,用免疫組化法分別檢測缺血側海馬CA.區Fas、FasL陽性 表達。結果與模型組比較,L?THP能夠縮小局灶性腦缺血一再灌注損傷大鼠腦梗死體積,降低血清CK活力。降低缺血 側海馬CA。區Fas、FasL凋亡蛋白的表迭。結論L.THP可能通過抑制神經元凋亡蛋白Fas、FasL表達,而對腦組織起到 保護作用。 [關鍵詞]四氫巴馬汀,左旋;腦缺血-再灌注損傷;腦保護作用;神經元凋亡蛋白 [中圖分類號]R971.1;R743[文獻標識碼]A[文章編號]1004—0781(2010)09一lll5—05 TheEffectsofL-tetrahydropalmatineontheExpressionofApoptosisProteinFasand FasLinHimppocampalCA lafterFocalCerebralIschemiaReperfusionInjuryin Rats MAXiao-yal,wUDong—mei2,LIMin93(1.DepartmentofPharmacy,theSecondAffiliatedHospital,Schoolof Medicine,Xi7anJiaotongUniversity,Xian710004,China;2.XianChildrensHospital,Xi7an710003,China; 3.DepartmentofHistologyandEmbryology,SchoolofMedicine,Xi。anJiaotongUniversity,Xt’an710061, China) ABSTRACT Objective TostudytheprotectiveeffectsofL—tetrahydropalmatine(L?THP)onfocalcerebralischemia reperfusioninjuryinratsandexpressionofapoptosisproteinFasandFasLinhimppocampalCAl. MethodsModifiedlJ0nga methodwasemployedtoestablishtheanimalmodeloffocalcerebralischemiareperfusion,ImageProPlus6.0softwarewasused todetectvolumeofcerebralinfarction,creatinekinase(CK)levelwasexaminedbyeolorimetry,andimmunohistochemical methodwasappliedtoanalyzeFasandFasLexpressedcells.Results Comparedwithmodelcontrol,L—THPdecreasedinfarct volume,CKactivityandreducedthelevelofFasandFasLinhimppocampalCAlafterfocalcerebralischemiarepeffusioninjury inrats.ConclusionLTHPhasthepmtectiveeffectonfocalcerebralischemiareperfusioninjurybyinhibitingneuron expressionofapoptosisproteinFasandFasL. KEYWORDS L-tetrahydropalmatine;Cerebralischemiareperfusioninjury;Cerebralprotectioneffect;Apoptosisprotein ofuelve‘:eU 腦血管疾病是嚴重威脅人類生命健康的常見疾病 之一,其中缺血性腦血管病發病人數較多,約占腦血管 疾病患者的70%。腦缺血損傷可以導致遲發性神經 元死亡(DND)。研究表明,神經元凋亡在DND的發 展過程中起重要作用,Fas、FasL是凋亡誘導家族的重 [收稿日期]2009—08—21[修回日期]2009—09—28 [基金項目]‘陜西省科學技術研究發展計劃項目[基金編 號:2008K13-02(2)] [作者簡介]馬小-啞(1965一),女,陜西綏德人,副主任藥 師,碩士生導師,碩士,研究方向:臨床藥理學。電話:029— 87679250,E,mail:mxy916@163.com。 要成員之一,兩者的結合是細胞凋亡的重要調節機 制。“。左旋四氫巴馬汀(L—tetrahydmpalmatine,L. THP)作為鎮痛、鎮靜、催眠藥物已應用臨床多年,基礎 研究發現,L—THP是植物性鈣離子阻滯藥,具有抗心肌 缺血、減輕大鼠全腦缺血一再灌注損傷及減少神經元凋 亡的作用。筆者在本實驗研究L—THP對局灶性腦缺 血一再灌注損傷的保護作用及對神經元凋亡蛋白Fas、 FasL表達的影響。 1材料與方法 1.1實驗動物健康SD品系大鼠160只,平均體質 量(240+20)g,雌雄兼有,由西安交通大學動物實驗 萬方數據 換頁 ?1116?HeraldofMedicineV01.29No.9September2010 中心提供,實驗動物生產許可證號:SCXK(陜)2007. 001。 1.2藥物與試劑 受試藥物:左旋四氫巴馬汀(羅通 定片,湖南洞庭藥業股份有限公司提供,批號:070609, 每片含L.THP30mg),實驗前以純化水配成0.4%, 0.2%,0.1%的混懸液,臨用前用渦旋混合器混勻后使 用。陽性對照藥:尼莫地平片(正大青春寶藥業有限 公司生產,批號:070987,每片含尼莫地平20mg),以 純化水配成0.1%的混懸液。10%水合氯醛(西安交 通大學醫學院第二附屬醫院制劑室生產)。肌酸激酶 (CK)試劑盒(南京建成生物工程研究所提供);兔抗 鼠Fas、FasL多克隆抗體、山羊抗兔IgG抗體及免疫組 化DAB顯色劑(北京奧博森生物技術有限公司提供。 1.3儀器SD-78型雙極電凝器(上海醫用電子儀器 廠)。UV-2550紫外可見分光光度計(日本島津公司)。 AO組織切片機(美國optical公司)。PYX—DHS隔水式 電熱恒溫培養箱(上海市躍進醫療器械廠)。FM包埋 箱(上海福瑪實驗設備有限公司)。OlympusBx40型光 學顯微鏡(日本Olympus株式會社)。Q550CW圖像信 號采集與分析系統(德國LEICA公司)。 1.4實驗動物分組與給藥方法①將60只大鼠隨機 分為6組,每組10只。假手術組、模型組給予純化水 10mL?kg~,陽性對照組給予尼莫地平溶液 10mg?kg一,低、中和高劑量藥物組給予L—THPl0,20, 40mg?kg~。在缺血2h再灌注6h測定腦梗死體積 和血清CK活力。②將100只大鼠隨機分為5組,假 手術組、模型組給予純化水10mL?kg~,陽性對照組 給予尼莫地平溶液10mg?kg~,中和高劑量藥物組給 予L—THP20,40mg?kg~,每組根據缺血一再灌注時間, 分別缺血2h再灌注6,12,24,48h,合計20小組。免 疫組化法測定Fas、FasL的陽性表達。各組動物連續 灌胃給藥5d,qd,再灌注期間連續給藥。 1.5模型的制備大鼠局灶性腦缺血一再灌注模型的 制備采用Longa法稍作改良心j,建立大鼠大腦中動脈 阻塞(MCAO)局灶性腦缺血一再灌注模型:麻醉大鼠, 于頸部左側做切口,在頸外動脈(ECA)剪--d,口,將 線栓自ECA經頸總動脈(CCA)分叉處插入頸內動脈 (ICA),將線栓推至大腦中動脈(MCA),待大鼠麻醉清 醒后,若觀察到行走時向右側轉圈即認為符合實驗的 入組標準,到各灌注時間拔出線栓,實行再灌注。假手 術組僅將尼龍線放入ECA,不進入ICA。 1.6血清CK活力測定采用摘眼球法,取大鼠新鮮 血液2mL,待血清析出后,3000r?min‘1(r--15em)離 心10rain。取上層血清約1mL,裝于具塞離心管中, 參照CK試劑盒說明書,按步驟操作,室溫下用紫外分 光光度計測定各組吸光度(A值),計算CK活力。 1.7腦梗死體積測定將進行完眼球取血的大鼠迅 速斷頭處死,取出全腦,一20℃速凍10min,去除嗅球、 小腦和低位腦千,然后將腦從額極至枕極連續冠狀切 片,每2mm一張,共5或6片。將腦切片放入1% ,rrc磷酸緩沖液中,在37℃水浴箱中溫孵30min,用 10%多聚甲醛固定24h后,將固定的腦片按切片順序 排列,數碼相機攝相。利用ImageProPlus6.0專業圖 像分析軟件測出每個腦片梗死面積,梗死體積=梗死 面積X厚度(2mm),并將所得數值相加得全腦梗死灶 體積的近似值。 1.8標本采集和組織切片的制備將缺血一再灌注不 同時間段的大鼠,用10%水合氯醛3mL?kg。1腹腔麻 醉,暴露心臟,用灌注器經心尖、左心室插入到主動脈 內,先用0.9%氯化鈉溶液,然后改用4%多聚甲醛灌 注、固定大鼠約1h,灌注完畢后,取出全腦去除嗅球、 小腦及低位腦干后,冠狀切取海馬區腦組織,浸于原固 定液24h(4℃)后,取出流動水沖洗24h,再將沖洗后 的腦組織經85%乙醇浸泡脫水以備石蠟切片。經常 規梯度乙醇脫水,二甲苯透明,浸蠟,包埋,切片,用于 Fas、Fasl免疫組化染色。 1.9圖像分析及采集 免疫組化染色后在400倍光 學顯微鏡下,在大鼠缺血側海馬CA.區隨機選取5個 視野進行觀察,以細胞內出現鮮亮的棕黃色顆粒為陽 性細胞。并記錄Fas、FasL陽性細胞表達總數,取其平 均值。然后采用圖像信息采集與分析系統采集圖片。 1.10統計學方法實驗數據以均數±標準差(i±s) 表示,采用SPSSl3.0統計軟件進行分析,兩組以上計 量數據比較采用單因素方差分析(one—way,ANOVA), 其中兩兩比較采用LSD檢驗,P<0.05表示差異有顯 著性。 2結果 2.1大鼠腦梗死體積和血清CK活力的檢測結果 TTC染色后觀察到,正常組織呈紅色,梗死灶呈蒼白 色,界限明顯。假手術組腦組織均勻紅染無梗死灶,其 他各組非缺血側染色基本呈紅色,腦缺血一再灌注后腦 梗死體積明顯增大,缺血側模型組梗死范圍最大,其他 給藥組梗死范圍有不同程度的縮小。與模型組比較, 陽性對照組、高劑量藥物組的腦梗死體積明顯減少 (P<0.01),而低劑量和中劑量藥物組腦梗死體積雖有 所縮小,但差異無顯著性。可見L—THP可以縮小由于 局灶性腦缺血一再灌注損傷造成的腦梗死體積。模型 組與假手術組比較,大鼠腦缺血一再灌注后血清CK活 萬方數據 換頁 醫藥導報2010年9月第29卷第9期 ?1l17? 力明顯升高(P<O.01)。與模型組比較,陽性對照組、 中劑量和高劑量藥物組血清CK活力明顯降低(P< 0.01)。低劑量藥物組CK活力雖有所降低,但差異無 顯著性。說明L-THP具有降低局灶性腦缺血一再灌注 大鼠血清CK活力的作用。見表1。 表1L.THP對局灶性腦缺血.再灌注大鼠腦梗死體積、血 清CK活力的影響 Tab.1TheeffectsofL.THPonvolumeofcerebral infarctionandserumCKactivityafterfocalcerebralischemia- reperfusioninrats i+s 緝別 大鼠/ 劑量/腦梗死體積/ CK/ 4… 只 (mg?kg。) (mm3)(g?L。) 高劑饋藥物組 lO40173.0±53.8“1.6±0.4“ 中劑量藥物組 lO20255.1±57.22.3±0.7“ 低劑苗藥物組 1010282.2_+27.52.8±0.4 陽性對照組 lO10 180.1-+58.1“1.0+0.3“ 模型組 10 … 294.0±72.8“3.3+0.4也 假于術組 10…0.0土0.00.9±O.1 與模型組比較,“P<O.01;與假手術組比較,~P<O.Ol Comparedwiththemodelgroup,“P<0.0l;Comparedwith theshamoperationgroup,“P<0.01 2.2大鼠神經元Fas蛋白表達情況與假手術組比 較,模型組中海馬CA,區Fas的陽性細胞表達在各灌 注時間段均明顯增加(P<0.01)。在腦缺血2h再灌 注6h陽性表達就開始增多,隨著再灌注時間的延長, 在再灌注24h時Fas的陽性細胞表達數相對6,12h 有所增多,達到高峰,在48h降低。與模型組比較,陽 性對照組,中劑量和高劑量藥物組在海馬CA。區Fas 的陽性細胞表達在各灌注時間均有所減少,差異有顯 著性或極顯著性(P<O.05或P<O.01)。說明L—THP 能減少局灶性腦缺血一再灌注損傷大鼠海馬CA。區Fas 的陽性細胞表達。與陽性對照組比較,中劑量和高劑 量藥物組在降低大鼠局灶性腦缺血一再灌注后海馬 CA.區Fas陽性細胞表達方面差異無顯著性。見表2。 光學顯微鏡下觀察到缺血側假手術組海馬CA,區可見 散在少量Fas陽性細胞表達,模型組可見主要表達在 胞質和胞核的淡棕色的弱陽性顆粒沉積。其余各干預 組見少量淡棕色的陽性細胞。見圖1。 2.3大鼠神經元FasL蛋白表達情況腦缺血一再灌 注后,模型組在缺血2h再灌注6h開始FasL陽性細 胞有明顯表達,在再灌注24h時表達的陽性細胞數明 顯增多,達到高峰,在48h開始趨于降低。與假手術 組比較,海馬CA。區FasL的陽性細胞表達在再灌注6, 12,24h均明顯增加,差異有顯著性或極顯著性(JP< 0.05或P<0.01),再灌注48h組雖然FasL蛋白陽性 表達數增多,但差異無顯著性。說明局灶性腦缺血一再 表2L-THP對局灶性腦缺血-再灌注大鼠海馬CA。區Fas陽性細胞表達的影響 Tab.2TheeffectsofL-THPontheexpressionofFas-positivecellsafterfocalcerebralischemia-reperfusioninhippocampal CA,amofratsi±s 。。 大鼠/ 劑量/ 海馬CA,【)(Fas孵j性細胞數 …。 只(mg.kz一1) 6h12h24h48h 高劑最藥物組 2040 4.7±0.6“6.7-.1.5”6.0±0.3“5.1±0.2“ 中劑量藥物組 2020 6.0±0.5“7.0±0.4”8.0±0.4“9.0+1.6n 陽性對照組 20lO5.O-vO.6“6.0±0.2“ 6.0±0.9“4.8-+0.2“ 模型組 20 … 11.0±0.7”14.0+0.6”16.O±1.4“11.0±1.6婦 假手術組 20 … 3.0±0.24.0+0.37.O±0.34.0±0.4 與模型組比較,“P<0.01,“P<0.05;與假手術組比較,”P<0.01 Comparedwiththemodelgroup,“P<O.01,”P<O.05;Comparedwiththeshamoperationgroup,”P<0.Ol AB C DE 圖1各組再灌注24h海馬CA,區FAS免疫組化染色(×400) A:假手術組;B.模型組;C.陽性對照組;D.高劑量藥物組;E.中劑量藥物組 Fig.1 ImmunohistochemicalstaininginofFAShippocampalCAlan組at24hafterreperfusion(x400) A.shamoperationgroup;B.modelgroup;C.positivecontroldruggroup;D.highdosedruggroup;E.mediumdosedruggroup 萬方數據 換頁 ?1118?HeraldofMedicineV01.29No.9September2010 灌注損傷能夠引起腦組織FasL的陽性表達。與模型重要的臨床意義。因線栓法MCAO模型具有不開顱、 組比較,陽性對照組在各灌注時間均能降低海馬CA,損傷小、效果穩定且可準確控制缺血及再灌注時間的 區FasL的陽性細胞表達,在再灌注24h作用顯著(P< 優點而被認為是腦缺血-再灌注損傷的標準模型"J。 0.01),各給藥干預組中,高劑龜藥物組在海馬CA,區實驗采用嚴格的動物實驗納入標準和1Trc染色結合 FasL的陽性表達在灌注6,12,24h時均有明顯的減的方法,雙鶯標準驗證r腦缺血動物模型是否合格。 少,差異有顯著性或極顯著性(P<O.05或P<0.01),在腦缺血引起腦血流阻斷后,短期的腦組織缺血后 再灌注48h時雖有所減少,但差異無顯著性。說明應再灌注可以減輕缺血引起的腦損傷,但長時間的缺血 用L—THP40mg?kg‘1能夠降低局灶性腦缺血-再灌注恢復血液灌流后不但不能恢復其功能和結構,反而加 損傷后腦內FasL的陽性表達,在缺血-再灌注早期作重其功能障礙和結構損傷。目前多認為MCAO缺血 用顯著。與陽性對照組比較,中劑量和高劑量藥物組 90—180min為理想的缺血時間【4]。本實驗在預實驗 差異無顯著性。說明陽性對照組與中劑量和高劑量藥期間通過1Trc染色分別比較在缺血1,2,3h時,腦組 物組降低局灶性缺血一再灌注大鼠腦內FasL陽性表達織梗死面積的大小,發現缺血1h腦梗死面積較小,缺 方面差異無顯著性。見表3。光學顯微鏡下觀察到缺 血2h時梗死面積增大,且比較穩定,3h時可以獲得 血側假手術組海馬CA,區可見散在分布表達FasL蛋最大的梗死面積。通過比較缺血.再灌注后動物的死 白的陽性細胞,模型組海馬CA,區明顯觀察到棕黃色亡率,發現缺血2h再灌注48h動物的死亡率為13%, 分布的陽性細胞,表現為細胞固縮、深染、結構不清,細 缺血3h再灌注48h后動物的死亡率達到39%,因此 胞膜或胞質有棕黃色顆粒沉積,以細胞膜陽性顆粒沉本實驗選擇缺血2h既滿足了缺血一再灌注后治療所要 積最為明顯。其余各給藥干預組FasL陽性細胞數明求的最佳治療時間窗,又能提高實驗的成功率,可以有 顯減少。見圖2。效反映L—THP抗局灶性腦缺血一再灌注損傷的治療效 3討論果及能更好的研究L—THP保護腦缺血?再灌注損傷的 臨床缺血性腦血管病中,60%患者為大腦中動脈機制。 閉塞,因此研究MCAO所造成的腦缺ffIL疾病具有十分7rrc染色腑梗死體積測量是研究藥物對腦血管疾 表3L-THP對局灶性腦缺血一再灌注大鼠海馬CA。區FasL陽性細胞表達的影響 Tab.3TheeffectsofL-THPontheexpressionofFasL-positivecellsafterfocalcerebralischemia-reperfusioninhippocampal CA.areaofratsi±s 高劑苗藥物組 20406.1±0.9”9.5±0.7“13.7±2.3“14.2±2.9 中劑量藥物組 20 2012.2±3.6 14.8+2.015.0+1.6“12.3±2.0 陽性對照組 201010.3±2.5 12.4±1.613.4+1.7“ 12.6±2.2 模型組 20 … 11.3士0.8“18.4+2.1”25.8-+3.4“ 15.2±2.1 假手術組 20 … 6.2±1.28.7-+1.66.2±1.39.3-+1.9 與模型組比較,“P<0.05。一P<0.Ol;與假手術比較,“P<0.05,“P<0.Ol Comparedwiththemodelgroup,‘1P<0.05,’2P<0.01;Comparedwiththeshamoperationgroup,+3P<O.05,’4P<O.01 AB C DE 圖2各組再灌注24h海馬CAl區FasL免疫組化染色()<400) A.假手術組;B.模型組;c.陽性對照組;D.高劑量藥物組;E.中劑量藥物組 Fig.2InnnunohistochemicalstainingofFasLinhippocampalCAl areaat24hafterreperfusion(×400) A.shamoperationgroup;B.modelgroup;C.positivecontrolgroup;D.highdosedruggroup;E.mediumdosedruggroup 萬方數據 換頁 醫藥導報2010年9月第29卷第9期 -1l19? 病療效的常規方法,是神經保護藥物基礎研究的重要 評價指標,具有簡捷、直觀的特點。其基本原理:TTc (2,3,5一氯化三苯基四氮唑)是一種脂溶性光敏感復合 物,它是呼吸鏈中吡啶.核苷結構酶系統的質子受體, 與正常腦組織中的脫氫酶反應而罨深紅色脂溶性物 質,而梗死組織內因脫氫酶活性下降,不能反應,故不 顯色而呈蒼白色。實驗中通過1TrC染色測定腦組織 梗死體積發現,假手術組未見腦梗死灶,腦片成均勻紅 染。模型組腑梗死體積最大,在冠狀切片中,以第3片 腦片梗死范圍最大,這與大腦中動脈所支配的供血區 域相吻合。實驗結果表明L—THP可以挽救因缺血引 起的缺血半暗帶內的細胞,縮小由于局灶性腦缺血一再 灌注損傷造成的腦梗死體積,起到神經保護的作用。 CK是一種細胞內酶,主要分布在骨骼肌,其次為 腦組織和心肌。研究認為,血清CK一樣可以作為腦 內神經細胞損害的特異性生化指標,當腦組織受到損 傷時,CK活力增加一。。本實驗結果濕示L—THP具有 降低局灶性腦缺血一再灌注大鼠血清CK活力的作用, 從生化角度間接反映L—THP對局灶性腦缺血再一灌注 損傷的腦組織具有保護作用。 Fas屬于腫瘤壞死因子受體家族成員,為凋亡刺激 因子,其配體是細胞凋亡因子FasL,Fas、FasL是凋亡誘 導家族的重要成員之一。Fas與FasL結合,可促發一 系列細胞內反應,最終導致靶細胞的Caspase激活,凋 亡細胞增多:6】。本實驗發現,腦缺血.再灌注損傷能夠 引起腑組織Fas、FasL的陽性細胞表達增多,應用L— THP40mg?kg。能夠下調局灶性缺血.再灌注損傷后 腦內Fas、FasL陽性細胞表達,減少局灶性腦缺血一再灌 注后神經細胞凋亡,這可能是其對腦缺血一再灌注損傷 保護機制之一。 腦缺血.再灌注損傷機制眾多,目前大量的研究認 為L—THP可減少全腦缺血一再灌注損傷后神經元的死 亡,對腦缺血一再灌注損傷具有一定的保護作用。可能 通過在缺血一再灌注早期增加ATP含量,減少乳酸產 生,降低神經元凋亡的發生"1;阻斷鈣通道,減少鈣超 載,抑制缺血.再灌注后腦組織鈣聚集博o;同時能夠通 過減少自由基產生、抑制炎癥反應【9。和減輕一氧化氮 (NO)介導的神經毒性¨毗等機制發揮對腦缺血.再灌 注損傷的腦保護作用。本實驗通過選擇局灶性腦缺 血一再灌注模型,在此基礎上觀察L—THP對腦缺血.再 灌注損傷后凋亡蛋白Fas、FasL的影響,發現L-THP可 通過抑制神經組織內凋亡蛋白Fas、FasL表達,減少細 胞凋亡的發生,從而改善局灶性腦缺血一再灌注損傷大 鼠腦梗死體積,降低CK活力,起到腦組織保護作用。 [DOI]10.3870/yydb.2010。09。001 [參考文獻] [1]李李,劉英,康相濤.主要凋亡基因對細胞凋亡的 調控[J].解剖科學進展,2007,13(1):62—65. [2]馬小旺,于美納。鄧秀玲,等.消旋四氫巴嗎汀對局灶性 腦缺血.再灌注損傷模型大鼠的保護作用[J].醫藥導 報,2009,28(11):1432—1436. [3]張榮媛,張宏偉,尚愛加.大鼠人腦中動脈缺虹一再灌注 模型制備及行為學評價標準的改進[J].軍醫進修學院 學報,2008,29(5):422—423. [4]王志萍,曾岡明.線柃法制備大鼠腦缺血一再灌注模喇的 研究進展[J].國外醫學:麻醉學與復蘇分冊,2005,26 (3):144—146. [5]尤華,王煜曼.白細胞、血清肌酸激酶在腦血管疾病 中的變化及判斷預后的意義[J].中華醫學研究雜志, 2005,5(3):268-269. [6] BIFF,XIAOB,HUYQ,eta/.Expressionandlocalization ofFas—associatedproteinsfollowingfocalcerebralisehemia inrals[J].BrainRes,2008,1191(1):30-38. [7]湯彥,楊光田,蔣崇慧.羅通定對大鼠急性全腦缺血. 再灌注損傷中一氧化氮內皮素.1及能量代謝的影響 [J].急診醫學,2000,9(6):379—381. [8]陳齊悶,楊光田.左旋四氫巴馬汀在大鼠全腦缺血.再灌 注時對肭組織鈣含鏈及腦細胞凋亡的影響[J].中國急 救醫學,2002,22(11):625—627. [9]陳燕啟。劉德紅,楊光田.左旋叫氧巴馬汀抗腦缺血一再 灌注損傷之作用研究[J].中國全科醫學,2004,7(10): 713—715. [10]王濤,曹學斌,孫翠梅,等.左旋網氖巴馬汀在腦缺血. 再灌注損傷中作用的實驗研究[J]。中國康復,2003,18 (3):135一J38. 萬方數據 換頁

    上一篇:小兒重癥支原體肺炎28例臨床分析   下一篇:沒有了
    :::: 支付方式 ::::
    :::: 服務熱線 ::::
    (周一至周五8:30-17:30)
    (周六至周日9:00-18:00)
    服務電話:020-61131011
    020-61131022 轉82
    傳真:020-61131022
    電子郵件:[email protected]
    [email protected]
    服務QQ:130009919
    130008818
    :::: 熱點文章 ::::
    :::: 相關文章 ::::

    · MBA
    · MPA
     · 教育碩士
    · 法律碩士
    · 工程碩士

    服務電話:020-61131011;020-61131022 轉82 投訴電話:020-61131011;020-61131022 轉88 傳真:020-61131022
    電子郵件:[email protected] [email protected] 服務QQ:130008818 130009919 (工作時間:周一至周五8:30-20:30 周六至周日9:00-18:00)
    © 2002-2004 輕松論文網  網絡實名:輕松論文
    SiteMap
    8888彩票 jimei6666.com | www.731996.com | 8003aa.com | www.hg703.com | pj88488.com | www.989405.com | 6403u.com | www.mgm868002.com | 3467b.am | www.9187n.com | 3967f.com | www.77801w.com | 9030s.com | www.hczx9.com | www.234374.com | www.483770.com | www.775412.com | 8742ll.com | www.336rrrr.com | 8899vn77.com | www.870884.com | kbv8832.com | www.2875n.com | www.a4737.com | www.544559.com | www.322511.com | ylzz577.com | www.z69096.com | xx888a.com | www.flcb2.com | www.31955.com | 3844mm.com | www.5856885.com | 44yy8331.com | www.314005.com | www.567722.com | 7726iii.com | www.35918b.com | www.4759vv.com | bet888000.com | www.3157e.com | 908080y.com | www.550424.com | www.4996tl.com | 3049b.com | www.188926.com | www.323365.com | 3685o.com | www.12018.cc | www.40033.1540033.com | 5443rr.com | www.yzqhyz.com | www.8124l.com | b47479.com | www.30350l.com | 3844y.com | www.599645.com | www.jy879.com | 73055.com | www.501324.com | www.383335.com | 668cp.com | 566777q.com | www.8905x.com | 888hg.com | 0008c.com | www.zzyl66.com | 1164.com | 118888a.com | www.pgylc.cc | www.5395287.com | 3679cc.com | www.ck5578.com | www.48080c.com | bali3377.com | lll0055.com | www.yz7706.com | www.wn879.com | 88850pp.com | www.679061.com | www.hg773999.com | 3522kk.com | www.371935.com | www.xpj16683.com | www.vns4858.com | 3552f.com | www.26163m.com | www.70022.com | ff67890.com | www.345897.com | www.o32031.com | www.ylg89.com | 512800.com | www.607335.com | www.0600x.cc | www.656022.com | 00558.com | 01234rr.com | www.c6167.com | www.770202.com | uuu8827.com | js75.com | www.500285.com | www.261610.com | www.1008msc.com | 78111133.com | 8159ww.cc | www.586113.com | www.xj6009.com | www.9702xx.com | 5360t.com | 8381tt.com | www.808390.com | www.7366009.com | www.333222c.com | 55811.com | www.206881.com | www.725158.com | www.lb22222.com | 2267k.com | 78666g.com | www.562602.com | www.4323u.com | www.cfcp234.com | bogou900.vip | 28288ff.com | z47479.com | www.hx5566.com | www.780780c.com | www.3122jj.com | www.1869p.com | 44009193.com | 14119455.com | www.186371.com | www.88065d.com | www.08bet8.com | www.3657z.com | d62365.com | dod688.com | 22296ai.com | www.8499c.com | www.91779r.com | www.hg7211z.com | www.yh77701.com | 00xx8331.com | 463q8.com | www.33997u.com | www.81520m.com | www.083377.com | www.hg8449.com | www.yh7777.cc | 00558.com | 4636677.com | 51200hh.com | www.510830.com | www.32123c.com | www.v2662.com | www.77731v.com | www.133dvd.com | 1077aa.com | 3416m.com | hg97222.com | www.178723.com | www.868422.com | www.js18683.com | www.xpj558888.com | www.bai3344.com | www.3xh3.com | www.hg77719.com | b2554.com | 26668u.com | 88772105.com | 2820t.com | bet777000.com | www.508477.com | www.sxyl0.com | www.80065m.com | www.89789v.com | www.8967l.com | www.25msc.com | www.936699.com | 0805u.com | a7742.com | 896288.com | 1253-6.com | yhw7.cc | www.106265.com | www.22fzc.com | www.88599.com | www.083377.com | www.06387777.com | www.9895e.com | www.5203666.com | www.939168.com | www.hg8547.com | www.wn879.com | www.mgm004.com | www.333222d.com | www.445884215.com | 8790l.com | 131ff.net | 1077kkk.com | 0747l.com | feicai0563.com | y00000.com | 8449qq.com | 4488g.com | 32212l.com | 88993r.com | 8037uuu.com | 6261520.com | 50067c.com | 3024m.com | 78808b.com | yz5488.com | 7434.com | 3379cc.com | 185647.com | www.033033s.com | 8036c.com | 923370.com | bst979.com | www.pj550077.com | www.yh02345.com | www.39695q.com | www.76060l.com | www.ty971.com | 2846b.com | 3535394.com | www.aobo9.com | www.995l.net | www.805kj.com | www.yf220.com | www.477518.com | www.7111e.com | www.A11100.COM | www.89677k.com | www.621051.com | www.3w28.com | www.504446.com | www.w77929.com | www.9149e.com | www.926013.com | www.am5432.com | www.832793.com | www.530629.com | 520666.com | 8881481.com | 00ww8331.com | 80850b.com | 1343.com | www.g32365.com | www.7498.com | www.19019j.com | www.38775yy.com | www.22211d.com | www.2632w.com | www.542676.com | 0694.com | 2566h9.com | 888992255.com | 2649kk.com | www.67797w.com | www.512411.com | 3089u.com | 2842266.com | 38850011.com | www.25673d.com | www.242222.com | www.89599w.com | www.81508y.com | www.68682d.com | www.cp8015.cc | www.021067.com | 32689.co | jing822.com | www.494905.com | www.vn95500.com | www.s948s.com | www.w94600.com | www.31847.com | www.321693.com | 908080j.com | hg10t.com | 35uu.vip | www.pj9448.com | www.cp55.com | www.bj299.com | www.675630.com | 666vn77.com | 1bet2.com | 4809q.com | www.pj15778.com | www.83309.com | www.78680p.com | www.277ak.com | www.106276.com | 11555156.com | 44112229.com | www.hg2516.com | www.33678qq.com | www.08588c.com | www.516105.com | 36402222.com | r72227.com | www.hg755.com | www.904044.com | www.78680z.com | www.jcai5.com | 8790b.com | 54248800.com | www.jsc999.com | www.siji5.com | www.888999qipai.com | www.sj119.9slyl.com | 55155e.com | 5478x.com | 87665j.com | www.yy6656.com | www.xj6003.com | www.33ttz.com | 64898d.com | 672bet.com | www.25288t.com | www.5504b.com | www.ky1007.com | www.186753.com | 4270ff.com | 6830x.com | www.ylg1212.com | www.84499q.com | 10050537.com | 7605v.com | www.1010160.com | www.390737.com | www.599641.com | 00774ii.com | www.b3654.com | www.10999h.com | www.0967005.com | www.153880.com | 550111f.com | www.25288w.com | www.7920l.com | www.339967.com | jj3405.com | www.7607633.com | www.j63568.com | www.653152.com | 78115500.com | www.7435k.com | www.7366003.com | www.587989.com | 3416u.com | www.80063355.com | www.js69vv.cc | 4379w.com | 112m.net | www.l5503.com | www.hm2255.com | 2146o.com | www.655666h.com | www.amjs779.com | 44ff8331.com | 2643j.com | www.hg98029.com | www.820737.com | xpjxianlu.com | www.2x0048.com | www.86339k.com | 1479d.com | g47479.com | www.hg8ww.com | www.550637.com | 56987yy.com | www.9101901.com | www.ch8955.com | 37111w.com | www.amdc0005.com | www.5441w.com | j15jj.com | www.76543c.com | www.hd8677.com | 3178vv.com | 7004.am | www.63606o.com | 61789g.com | 90856m.com | www.40288g.com | 386kze.com | 054007.com | www.86339l.com | 8742g.com | www.8851i.com | www.452955.com | yyh910.com | www.zun171.com | www.hg0298.com | 3169j.com | www.xin888666.com | www.87668p.com | 67890ddd.com | www.990909.com | www.962505.com | f32365.com | www.922908.com | www.040417.com | 9103jj.com | www.792065.com | rr5144.com | www.js520234.com | www.2109y.com | 3416u.com | www.0849.com | www.41518e.com | www.pj57777.com | www.6939l.com | 818555.vip | www.bhhxled.com | www.cb2388.com | 97570ylc.com | www.535087.com | 118888x.com | www.js9997.com | www.959552.com | 496.net | www.823250.com | 78666f.com | www.phsun31.com | www.558738.com | hg91668.com | www.hd8677.com | 11422e.com | www.138cpq.com | www.51515i.com | www.7435i.com | www.36166b.com | 3778gg.com | www.6880hh.com | mr8001.com | www.hg8375.com | www.332950.com | www.e50336.com | www.64700.com | 22299qq.com | www.70669a.com | 66185.com | www.55526a.com | JS1388q.com | www.7607633.com | www.638809.com | 51200jj.com | www.61233z.com | m4255.com | www.9737ff.com | 5906oo.com | www.hxshlj.com | 99589j.net | www.25288n.com | www.560251.com | www.wn2008.com | www.022q.cc | 2927.com | www.9356q.com | xpj6001.com | www.t09738.com | u8159.cc | www.110252.com | 2021c.com | www.hg8xx.com | 3616b.com | www.d92776.com | feicai0510.com | www.lfcp123.com | 6487ooo.com | www.549009.com | 0496556.com | www.hg0817.com | 77116556.com | www.1389dd.com | P35s.com | www.zgr111.com | s86811.com | www.am0666.com | 22ss8332.com | www.99113w.com | 1348.com | www.19k0048.com | 55331v.com | www.490807.com | 3640c.com | www.1466g.com | 8381oo.com | www.80767f.com | 3089l.com | www.8039n.com | 1665f.com | www.853530.com | www.bl45.com | www.035989.com | www.531msc.com | 59889r.com | www.61130.com | 56988c.com | www.86339d.com | 06388383.com | www.8667b.com | www.bmw9964.com | www.635893.com | www.299888.com | 015015.com | www.938h.cc | 228888u.com | www.33074.com | 4647j.com | www.65707g.com | 1489i.com | www.497918.com | www.kk8996.com | 88052.net | www.185141.com | 3846aaa.com | www.bet73d.com | btt897.com | www.444072.com | www.681234.com | 31n.net | www.20365vip.com | 2190m.com | www.649677.com | www.456228.com | 01234p.com | www.yuehengsz.com | 6245h.com | www.807979.com | www.67843.com | xpj72.com | www.48330j.com | 7945ee.com | www.196049.com | www.ra0008.com | 61999yy.com | www.68689k.com | www.8124i.com | 111000rr.com | www.925713.com | 90307n.com | www.ch8955.com | www.20288r.com | bet3658.com | www.9533888.com | www.qian00.com | ctxcp76.com | www.http://07771.com/ | 99882007.com | www.569080.com | www.163888nn.com | 04666b.com | www.gu64.com | www.7893w54.com | 1408d.com | www.065815.com | www.66098.com | 8742ii.com | www.7036s.com | 31780000.com | 32424k.com | www.1429e8.com | 2851m.com | www.049049.com | www.06617a.com | 131p.net | P35q.com | www.pjjtzy.cc | pj626910.com | bet365vip.com | www.yh888809.com | www.7168801.com | ylzz6.cc | www.01924.com | www.x22365.com | 1665a.com | www.5856873.com | www.hg0088.lv | bmh988.com | www.66653z.com | www.js7009.com | pu38839.com | www.66332g.com | www.9388hg.com | hwcpkjw.com | www.960913.com | www.20199kk.com | 19880s.com | tzvip2025.com | www.52062z.com | www.bet33365.net | 1484vipc.com | www.126xc.com | www.4393.com | 008.so | 8cai29.com | www.5189666.com | www.zr985.com | 1259w.com | www.36787b.com | www.333980.com | 8381v.com | www.99677o.com | www.a80288.com | 226688c.net | 69111o.com | www.5441g.com | www.ns6677.com | 2595t.com | ddcp99.com | www.66376h.com | www.986msc.com | z86811.com | 4809f.com | www.790964.com | www.1829w.com | 8869emc.com | 50038s.com | www.yh76i.com | www.944577.com | 50067s.com | 21866f.com | www.26299y.com | www.2y932.com | 6220u.com | 6789blr.biz | www.fcff2.com | www.15365e.com | www.6491v.com | 93936i.com | www.273503.com | www.8855287.com | www.1113890.com | 26668w.com | d7742.com | www.5086c.com | www.38345q.com | www.hwx88.com | 0015.com | www.91233e.com | www.8d878.com | www.5966xxx.com | 74668.com | c99474.com | www.131763.com | www.0076788.com | www.511289.com | 2924444.com | 92958b.com | www.177534.com | www.hg27388.com | www.p9478.com | www.4759ll.com | 7240t.com | xyhd237.com | www.1035f.com | www.291693.com | www.hg8102.com | 33115y.com | 88993b.com | www.318097.com | www.29496c.com | www.bd2019z.com | www.64877g.com | 00774bb.com | 11989y.com | www.517411.com | www.427786.com | www.4212g.com | www.4938r.com | 8522tttt.com | b05677.com | www.60123e.com | www.10113.com | www.621301.com | www.hg7942.com | 9195js.com | 3405y.com | jixiang17.com | www.lf888.club | www.83033c.com | www.bwinyz28.com | www.kk8996.com | 7894i.com | 459845.com | 44qq8332.com | www.99638e.com | www.103ak.com | www.110503.com | www.998855p.com | www.991224.com | 2709b.com | kdcp5.com | 2466.com | www.55885a.com | www.hy5455.com | www.35898b.com | www.55060w.com | www.452222.com | www.b005.com | 56988t.vip | 36400044.com | 77201.com | 00774aa.com | www.679000.com | www.65707r.com | www.12136m.com | www.mhcp.com | www.7t68.com | www.617701.com | 2595s.com | u15666.com | 00048m.com | pj88oo.com | www.52303a.com | www.862803.com | www.49956c.com | www.yy888.cc | www.sha0077.com | www.045890.com | www.20326.com | www.1cw9.com | l35151.com | 13789.com | 1076002.com | 1463p.com | man984.com | www.66376e.com | www.680477.com | www.055b.cc | www.29496d.com | www.x63568.com | www.299764.com | www.697002.com | www.488633.com | www.xy466.com | www.40818d.com | www.9321n.com | 7945.com | l277.com | df8x.com | 5004xx.com | 3568d.com | 138cpwz.com | 1104016.com | 59599r.com | 51133hh.com | 3121a.com | 32126h.net | www.35918v.com | www.223335.com | www.593500.com | www.801876.com | www.ct8855.com | www.595hc.com | www.8839g.com | www.50074f.com | www.80075x.com | www.ya2019r.com | www.6889792.com | www.7681004.com | www.557755.com | www.xyh6003.com | www.06386666.com | www.06820m.com | www.cn365m.com | www.vns6605.com | www.0088xpj.net | www.5446pp.com | www.7796877.com | www.4972p.com | www.fhcp2016.com | www.4694o.com | www.50999q.com | www.4694n.com | www.00773u.com | www.9170187.com | www.00778j.com | www.47506p.com | www.2894.com | www.057v.com | www.hg864.com | www.379801.com | www.89894q.com | www.50051y.com | www.5091w.com | www.le05.com | www.810706.com | www.689144.com | www.506969.com | www.139733.com | 2757u.com | 3189zz.com | 1133589.com | 4255x.com | 06381818.com | swtyggg.com | dwj6600.com | by9900.com | www.hg990077.com | www.pj23237.com | www.q9163.com | www.1003pj.com | www.604886.com | www.377666s.com | www.7920c.com | www.9646r.com | www.29277b.com | www.qucp2.com | www.548116.com | pj900.com | 0907.ws | kbj7268.com | 78808h.com | 0245x.com | www.602msc.com | www.9996xx.com | www.662678.com | www.rcw88.vip | www.5719d.com | www.2418k.com | www.3126j.com | www.669202.com | 59964ww.com | hg9168.vip | yzyz02.com | 3308a.com | www.1869e.com | www.am5544.com | www.ylg07.com | www.659202.com | www.4331a.com | www.37to.com | www.178937.com | 3049w.com | 8722kkkk.com | bg5888.com | www.vns3333.cc | www.xpj8548.com | www.71071t.com | www.78919b.com | www.5441r.com | www.318187.com | s01234.com | y4389.com | 22556r.com | www.333133h.com | www.hjdc48.com | www.85656.com | www.12455j.com | www.542116.com | e47479.com | 8590.cc | 632910.com | www.hg4010.com | www.d456x.com | www.556510.com | www.8000hc.com | www.137916.com | hb1432.com | 2jshhh.com | www.hg6914.com | www.91293.com | www.y8915.com | www.25688l.com | www.236002.com | f7454.com | 6489.am | 08159.com | www.js05888.com | www.854608.com | www.6613622.com | www.592113.com | 5369i.com | 0069.com | www.o22365.com | www.1168r.com | www.0601b.com | www.550164.com | l5429.com | ggg7570.com | www.pj9799.com | www.5099cc.com | www.xhg338.Com | www.312876.com | zhcp59.com | 6830w.com | www.4449.cc | www.80868e.com | www.923887.com | w5222.com | ee7742.com | www.g1137.com | www.69989f.com | www.qmkl0.com | 22yy8331.com | 6261bb.com | www.16297755.com | www.xpj2.net | www.828701.com | 0234aa.com | 253508.com | www.pj2299.com | www.3775q.com | www.394077.com | 78118833.com | www.a3a000.cc | www.818999.com | www.57578f.com | jidupt.com | P35r.com | www.6359.com | www.0600n.cc | www.770935.com | 2998r.com | www.86611t.com | www.198930.com | www.7782r.com | 3559qqq.com | t47479.com | www.2005132.com | www.7714o.com | 33933.com | 40033ddd.com | www.31399t.com | www.yh888a.com | www.301871.com | 3846a.com | www.7893w62.com | www.780sun.com | www.339531.com | hbs226.com | www.698012.com | www.688sb.21.sb | www.112070.com | 1294w.com | www.59503.com | www.910056.com | 95gamevip1.com | 822930.com | www.f4042.com | www.022tj.cc | 7811cc.com | www.10051005.com | www.47506z.com | www.500021.com | 4288oo.com | www.729666.com | www.308005.com | 4379k.com | zhcp70.com | www.85jsjs.com | www.820380.com | 00773oo.com | www.4126n.cc | www.345452.com | 3136ww.com | www.81866j.com | www.64566b.com | www.356776.com | 4255qqq.com | www.hq5177.com | www.102ak.com | 33885003.com | www.7111v.com | www.ya2019b.com | j3410.com | www.44466638.com | www.8c555.com | 15g2.net | zhcp15.com | www.89677f.com | www.196776.com | z7742.com | www.c7201.com | www.rcw8877.com | 1407.com | www.77731s.com | www.755670.com | 35222d.com | www.11ledian11.cc | www.987426.com | 4288ll.com | www.67886788.com | www.936336.com | 3510.com | www.1389hh.com | www.649880.com | j58955.com | www.51705.com | www.444801.com | j99345.am | www.cn365w.com | www.73166a.com | 2019tt.cc | www.6889.am | 87665c.com | www.1019997.com | www.16065d.com | 33318v.com | www.xpj220.com | www.00840t.com | 6895798.com | www.4329.com | www.669773.com | p2490.com | www.7225i.com | 3122e.com | www.38200j.com | www.737202.com | hhgz1144.com | www.886662.com | www.864955.com | 54240099.com | www.4058ff.com | bmw8002.com | www.333xhtd.com | www.84499r.com | 0198855.com | www.55526x.com | www.235812.com | 5005j.com | www.960023.com | 7811ss.com | www.hg901.com | www.698300.com | 883399v.com | www.0055sun.com | hd88599.com | www.56992.com | www.682918.com | 3844d.com | www.jsc044.com | 29918t.com | www.460707.com | www.234287.com | 2618zz.com | www.16878i.com | 888559.com | www.55545d.com | 97799m.com | www.58777q.com | www.c9223.com | p8999.cc | www.hg20.co | 23233i.com | www.dfh280.com | 33432f.com | www.7893w62.com | www.904830.com | 2649z.com | www.89777r.com | 05071133.com | www.55070z.com | kkk5144.com | www.678130.com | www.223335.com | www.333222w.com | www.1035v.com | 4809u.com | www.830363.com | 22214.com | www.678js333.com | dz825.com | www.3846t.com | 56033.net | www.z4777.com | www.299494.com | www.hg567000.com | www.978261.com | 50020033.com | www.33112.com | 7779t.cc | www.88065d.com |